Hemagliutinaciniu aktyvumu pasižyminčių baltymų išskyrimas iš rausvažiedžių ežiuolių šaknų ir jų frakcionavimas

Abstract

Įvadas. Augalų lektinai yra ląstelių agliutinaciją sukeliantys neimuninės kilmės glikoproteinai, pasižymintys biologiniu aktyvumu. Stebėtas šių junginių ir imunomoduliacinis efektas, atrankus vėžinių ląstelių apoptozės iniciavimas, priešgrybelinis bei antibakterinis poveikiai. Rausvažiedė ežiuolė (Echinacea purpurea L. (Moench)) gerai žinomas vaistinis augalas. Tačiau farmakologiškai įdomūs augalo baltymai nėra ištirti. Tikslas. Tyrime siekta išskirti ir frakcionuoti natyvinius baltymus iš rausvažiedžių ežiuolių šaknų ir nustatyti jų hemagliutinacinį aktyvumą. Metodai. Tyrimo objektas – šviežios rausvažiedės ežiuolės (Echinacea purpurea L. (Moench)) šaknys, surinktos Vytauto didžiojo universiteto Kauno botanikos sode 2015 m. lapkričio mėnesį. 30 g šviežių rausvažiedžių ežiuolių šaknų buvo homogenizuota su skystu azotu, sutrinant grūstuvėje. Homogeniški šaknų milteliai ekstrahuoti fosfatiniame buferyje santykiu 1:5 2 val. 4 °C temperatūroje. Ekstraktas centrifuguotas 8500 ×g greičiu. Atskirtas supernatantas naudotas baltymų išsodinimui - paimant 1 tūrį ekstrakto ir jį sumaišant su 4 tūriais šalto (- 20 °C) baltymų išsodinimo mišinio (10 % trichloracto rūgšties acetone tirpalo, turinčio 0,2 % β – merkaptoetanolio). Nusodinti baltymų dribsniai perplauti tris kartus acetonu su 0,2 % β – merkaptoetanoliu. Perplauti baltymai resuspenduoti fosfatiniame buferyje, pH 7,4. Baltymų kiekis mėginiuose nustatytas spektrofotometriniu Bradford metodu, naudojant jaučio serumo albuminą kalibracinei kreivei sudaryti. Baltymų mėginys užneštas ant HiTrap Q FF 1 ml anijonitinės jonų mainų kolonėlės. Prie kolonėlės matricos neprikibę baltymai išplauti 15 ml buferio A. Baltymai iš kolonėlės išskirti gradientinės eliuacijos metodu keičiant joninę eliuento jėgą nuo 0 iki 1 M NaCl, pH 7,4. Surinktos 5 ml frakcijos dializuotos buferyje A. Šių frakcijų hemagliutin