Hemolizinių anemijų laboratorinis vertinimas
Vertelytė, Dalia |
Recenzentas / Reviewer | |
Eidukaitė, Audronė | Komisijos pirmininkas / Committee Chairman |
Komisijos narys / Committee Member | |
Baranovaitė, Gerda | Komisijos narys / Committee Member |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member | |
Komisijos narys / Committee Member |
Magistro darbo autorius. Dalia Vertelytė Magistro darbo pavadinimas. Hemolizinių anemijų laboratorinis vertinimas Darbo tikslas: Įvertinti laboratorinių tyrimų pokyčius hemolizinių anemijų metu ir susieti juos su hemolizinės anemijos tipu. Tyrimo uždaviniai: Atlikti ir įvertinti bendro kraujo tyrimo rodiklių, laktatdehidrogenazės, haptoglobino ir tiesioginio antiglobulino testo tyrimų rezultatus asmenims su hemolizinėmis būklėmis; Palyginti asmenų su hemolizinėmis būklėmis grupes, atsižvelgiant į laktatdehidrogenazės aktyvumo ir jo viršutinės referentinės ribos santykį; Įvertinti laboratorinių rodiklių skirtumus pacientams su hemolizinėmis anemijomis, atsižvelgiant į paroksizminės naktinės hemoglobinurijos ląstelių klono buvimą. Tyrimo objektas ir metodai. Tyrimui atrinkti pacientai su hemopoezės sutrikimu. Iš jų atrinkti pacientai, kuriems buvo atlikti haptoglobino (HAPTO) ir laktatdehidrogenazės (LDH) tyrimai, o iš jų tyrime palikta 80 pacientų, kurių HAPTO koncentracija buvo maža. Į antrą tyrimo dalį įtraukti 26 pacientai, kuriems buvo atlikti tėkmės citometrijos tyrimai dėl PNH klono paieškos. Bendras kraujo vaizdas buvo tirtas analizatoriumi XE-5000 (Sysmex, Japonija), biocheminiai tyrimai atlikti naudojant automatinę sistemą – SYNCHRON UniCel® DxC 800 (Beckman Coulter, JAV), o tiesioginis antiglobulino testas (DAT) buvo atliekamas taikant hemagliutinacijos stulpelyje metodą (Biorad, JAV). PNH klono nustatymui buvo atliktas eritrocitų ir leukocitų imunofenotipavimas, naudojant tėkmės citometrą BD FacsCanto (BD Immunocytometry Systems, JAV). Rezultatai. Tiriant sergančiuosius su hemolizinėmis būklėmis DAT teigiamų ir neigiamų rezultatų dažnis tarp lyčių nesiskyrė. Nustatytos statistiškai reikšmingai mažesnės RBC, HGB, HCT ir didesnės TBIL koncentracijos pacientų pogrupyje su LDH/URL>1,5. Spearman‘o koreliacinė analizė parodė statistiškai reikšmingą atvirkštinį ryšį tarp LDH ir HAPTO – didėjant LDH, mažėja HAPTO koncentracija (R=-0,239; p=0,033). Anemiją charakterizuojančių rodiklių – HGB ir RBC atvirkštinis ryšys su LDH rodikliu taip pat statistiškai reikšmingas. PNH-jai būdingo rodiklių derinio – DAT neigiamo rezultato ir padidėjusio LDH aktyvumo dažnis tarp vyrų ir moterų statistiškai reikšmingai nesiskyrė. Nustatyta, kad sergančiųjų su PNH klonu grupėje LDH/URL buvo didesnis net 12 kartų, o HAPTO, RBC ir HGB buvo statistiškai reikšmingai mažesni, nei pacientams be PNH klono. Išvados. Pacientams su hemolizėmis būklėmis nustatytas eritrocitų, hemoglobino kiekių sumažėjimas bei laktatdehidrogenazės aktyvumo padidėjimas. Skirtumų tarp lyčių nenustatyta. Asmenims, kurių laktatdehidrogenazės aktyvumo ir jo viršutinės referentinės ribos santykis buvo didesnis nei 1,5, nustatyti statistiškai reikšmingai sumažėję eritrocitų, hemoglobino, haptoglobino bei padidėję bendro bilirubino (padidėjusio netiesioginio bilirubino sąskaita) kiekiai. Laktatdehidrogenazės aktyvumas tiesiogiai siejosi su anemijos išreikštumu. Šie radiniai nurodo išreikštą hemolizės aktyvumą, kuris nepriklausė nuo lyties. Hemolize sergantiems pacientams, turintiems paroksizminės naktinės hemoglobinurijos ląstelių kloną, hemolizę ir anemiją atspindintys laboratoriniai rodikliai buvo pakitę labiau, nei pacientams, neturintiems paroksizminės naktinės hemoglobinurijos ląstelių klono. Uždegimui būdingų neutrofilų, nei neutrofilų/limfocitų rodiklių pokyčių ir skirtumų tarp tiriamųjų grupių neaptikta.
Author of a master‘s thesis. Dalia Vertelytė The title of the master‘s thesis. Laboratory evaluation of hemolytic anemia. The aim: To evaluate changes of laboratory tests during hemolytic anemia and relate them with of type of hemolytic anemia. Objectives: To evaluate hematology test results, lactate dehydrogenase (LDH) activity, haptoglobin (HAPTO) concentration and direct antiglobulin test (DAT) in patients with hemolytic status; To compare groups of patients according to levels of LDH activity to LDH upper reference limit ratio LDH/URL; To evuluate the changes of laboratory parameters in patients with hemolytic anemia according to presence of clone of paroxysmal norturnal hemoglobinuria (PNH). Patients and methods. Patients with disorders of hemopoiesis were included in the study, then patients tested for HAPTO and LDH were chosen, and additional selection was done – 80 patients with HAPTO concentration lower than 360 mg/l were left for the final analysis. 26 patients were included in flow cytometry analysis. Hematology tests were done using automated hematologic s XE–5000 (Sysmex, Japan). The biochemistry tests were run using clinical system – SYNCHRON UniCel® DxC 800 (Beckman Coulter, USA) and DAT were tested by column hemagglutination technique (Biorad, USA). The immunophenotyping of RBC and WBC was carried out for identification of PNH clone using flow cytometre BD FacsCanto (BD Immunocytometry Systems, USA). Results. The prevalence of negative DAT results didn‘t differ between male and female patients with hemolytic anemias. RBC, HGB, HCT values were significantly lower and TBIL – significantly higher in patients with LDH/URL1.5. Spearman‘s correlative test revealed reverse significant correlation between LDH and HAPTO (R=-0,239; p=0,033). The anemia markers –RBC and HGB significantly negatively correlated with the LDH. Frequency of markers characteristic to PNH (combination of DAT negative results and increased LDH) didn‘t differ between male and female patients. Patients having PNH clone had 12-fold increased of LDH/URL and lower HAPTO, RBC, HGB compared to patients without PNH clone. Conclusions. Patients with hemolytic statuses had decreased erythrocyte and hemoglobin values and increased lactate dehydrogenase activity. There were no differences in laboratory values between men and women. Patients with LDH/URL1.5 had significantly reduced erythrocyte, hemoglobin, haptoglobin and increased total bilirubin (due to increase of indirect bilirubin). LDH activity was directly related to anemia expression. These findings didn‘t depend on gender. Changes of markers indicating anemia and hemolysis were more pronounced in patients with hemolysis and PNH clone. There were no changes and differences of inflammatory markers – neutrophils, as well neutrophil to lymphocyte ratio – between investigated groups.